MPST Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401643

Panoramica

La MPST umana (3-mercaptopiruvato solfortransferasi) è una solfortransferasi mitocondriale e citosolica che catalizza la conversione del 3-mercaptopiruvato in piruvato, generando al contempo specie reattive dello zolfo e contribuendo al metabolismo endogeno dell’idrogeno solforato (H2S) e dei persolfuri. La MPST svolge un ruolo nell’omeostasi redox cellulare, nell’utilizzo degli amminoacidi solforati e nella regolazione della persolfidazione delle proteine, con effetti a valle sulla bioenergetica mitocondriale e sulla segnalazione della risposta allo stress. Un’alterata attività della MPST è stata associata a sensibilità allo stress ossidativo e a disregolazione metabolica, e le variazioni dell’espressione di MPST o della segnalazione dello zolfo sono studiate in contesti quali neurobiologia, segnalazione cardiovascolare e adattamento delle cellule tumorali. Nell’ambito della più ampia rete della transsolfurazione e delle specie reattive dello zolfo, la MPST offre un punto di ingresso meccanicistico per analizzare la segnalazione dipendente dai tioli e la funzione mitocondriale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MPST (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MPST in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MPST insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MPST a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MPST.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MPST per lo studio della segnalazione di MPST, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni MPST critici per la funzione di MPST
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MPST per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal MPST CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal MPST CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MPST. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal MPST Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR MPST (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MPST per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MPST definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.