mPRα Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402143-ACT

PAQR7 codifica il recettore di membrana del progesterone alfa (mPRα), un membro della famiglia PAQR implicato nella segnalazione rapida e non genomica del progesterone a livello delle membrane cellulari. mPRα è stato associato alla modulazione della segnalazione mediata da proteine G, inclusa la dinamica del cAMP e le vie chinasi a valle che influenzano i programmi di proliferazione, differenziamento e sopravvivenza cellulare. Nei tessuti umani, l’espressione di PAQR7 è correlata alla regolazione endocrina e a stati cellulari sensibili agli steroidi, rendendolo rilevante per lo studio delle reti trascrizionali dipendenti dagli ormoni e del cross-talk della segnalazione avviata dalla membrana. Vie di segnalazione del progesterone deregolate che coinvolgono PAQR7 sono state investigate nel contesto della biologia riproduttiva e dei meccanismi di malattia associati agli ormoni, supportandone l’uso come bersaglio di ricerca in studi di segnalazione cellulare e di genomica funzionale.

mPRα Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PAQR7 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

mPRα Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PAQR7 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PAQR7, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di mPRα. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PAQR7 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da mPRα nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via mPRα nelle cellule tumorali con espressione di PAQR7 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.