MPP3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-407044-ACT

La MPP3 umana (membrane palmitoylated protein 3), nota anche come membro 3 della sottofamiglia MAGUK p55, è una proteina scaffold della famiglia delle guanilato chinasi associate alla membrana che contribuisce a organizzare complessi proteici alla membrana plasmatica. Attraverso i suoi domini PDZ, SH3 e GK, MPP3 favorisce l’assemblaggio di componenti giunzionali e di segnalazione che regolano la polarità epiteliale, l’adesione cellula–cellula e l’accoppiamento con il citoscheletro. Queste funzioni collocano MPP3 in vie che controllano la stabilità delle giunzioni e il traffico di membrana, processi spesso alterati durante la progressione tumorale e la metastatizzazione. Un’espressione o una localizzazione deregolate delle proteine scaffold MAGUK, inclusa MPP3, sono state associate a cambiamenti nell’integrità della barriera e negli output di segnalazione rilevanti per la biologia del cancro e l’omeostasi tissutale.

MPP3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MPP3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MPP3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MPP3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MPP3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MPP3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MPP3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MPP3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MPP3 nelle cellule tumorali con espressione di MPP3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.