MOF Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401891-ACT

KAT8 codifica MOF (MYST1), un’istone acetiltransferasi della famiglia MYST che catalizza l’acetilazione della lisina 16 dell’istone H4 (H4K16ac), un importante marcatore della cromatina associato a cromatina aperta e a competenza trascrizionale. MOF agisce all’interno di complessi multiproteici per regolare l’attività di promotori ed enhancer, coordinare l’allungamento della trascrizione e modulare l’architettura della cromatina durante la replicazione e la riparazione del DNA. Attraverso questi ruoli epigenetici, MOF influenza la stabilità del genoma, la progressione del ciclo cellulare e le risposte allo stress; alterazioni dell’attività di KAT8/MOF e dei pattern di H4K16ac sono spesso studiate in contesti di programmi trascrizionali oncogenici e di segnalazione del danno al DNA deregolata. La sua posizione centrale nella regolazione della cromatina rende inoltre KAT8 un nodo utile per indagare il crosstalk tra il rimodellamento della cromatina dipendente dall’acetilazione e le vie di segnalazione che controllano proliferazione e differenziamento.

MOF Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di KAT8 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MOF Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus KAT8 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione KAT8, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MOF. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus KAT8 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MOF nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MOF nelle cellule tumorali con espressione di KAT8 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.