MMTAG2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-413147-ACT

Il gene umano C1orf35 codifica per MMTAG2, una proteina scarsamente caratterizzata con collegamenti emergenti alla regolazione mitocondriale e metabolica sulla base di annotazioni e profili di espressione in tessuti proliferativi. Le evidenze attuali suggeriscono che MMTAG2 possa partecipare all’omeostasi mitocondriale e ai processi di adattamento allo stress cellulare che influenzano la produzione di energia e l’equilibrio redox. Alterazioni della funzione mitocondriale e riprogrammazione metabolica sono caratteristiche ricorrenti nella biologia dei tumori e nei modelli di malattie neurodegenerative, rendendo C1orf35/MMTAG2 un bersaglio utile per studi meccanicistici di fenotipi associati alla bioenergetica. La ricerca su questo gene supporta inoltre la mappatura delle vie di segnalazione in contesti in cui la segnalazione mitocondriale interseca il controllo del ciclo cellulare e la proteostasi.

MMTAG2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di C1orf35 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MMTAG2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus C1orf35 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione C1orf35, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MMTAG2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus C1orf35 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MMTAG2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MMTAG2 nelle cellule tumorali con espressione di C1orf35 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.