Mms2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404777-ACT

UBE2V2 codifica a Mms2, uma variante de enzima E2 conjugadora de ubiquitina que não possui atividade catalítica, mas forma um heterodímero funcional com UBE2N/UBC13 para promover a montagem de cadeias de poliubiquitina ligadas por K63. Essa sinalização de ubiquitina não proteolítica sustenta a tolerância e o reparo de danos ao DNA, incluindo o reparo pós-replicação e o bypass de lesões sem erro mediado pela ubiquitinação de PCNA. A formação de cadeias de ubiquitina dependente de Mms2 também contribui para redes de sinalização responsivas ao estresse que se cruzam com a estabilidade do genoma e o controle de checkpoints do ciclo celular. A desregulação de vias de reparo de DNA mediadas por ubiquitina envolvendo UBE2V2 tem sido associada a alterações na carga mutacional e na sensibilidade celular ao estresse genotóxico, tornando-a relevante para estudos mecanísticos em biologia do câncer e em distúrbios de reparo do DNA.

Mms2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de UBE2V2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Mms2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus UBE2V2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição UBE2V2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Mms2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus UBE2V2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Mms2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Mms2 em células tumorais com expressão de UBE2V2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.