MMS19 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405964

Panoramica

MMS19 codifica MMS19, un fattore conservato implicato nel mantenimento del genoma grazie ai suoi ruoli nell’assemblaggio citosolico dei cluster ferro–zolfo (Fe–S) e nella maturazione di proteine nucleari Fe–S-dipendenti coinvolte nella replicazione e nella riparazione del DNA. Sostenendo l’integrità funzionale di molteplici enzimi del metabolismo del DNA, MMS19 contribuisce alla tolleranza allo stress replicativo, alla segnalazione della risposta al danno al DNA e alla stabilità cromosomica complessiva. L’alterazione di MMS19 è quindi rilevante per le vie che salvaguardano l’integrità del genoma e può influenzare la sensibilità cellulare a stressori genotossici. I processi legati a MMS19, quando deregolati, sono di interesse negli studi sull’accumulo di mutazioni, sul controllo dei checkpoint e sui meccanismi alla base dei fenotipi di instabilità genomica osservati in contesti associati a malattie.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MMS19 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MMS19 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MMS19 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MMS19 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MMS19.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MMS19 per lo studio della segnalazione di MMS19, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni MMS19 critici per la funzione di MMS19
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MMS19 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal MMS19 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal MMS19 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MMS19. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal MMS19 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR MMS19 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MMS19 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MMS19 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.