MLL3 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-437348-LAC

Kmt2c codifica la metiltransferasi murina della lisina istonica MLL3, un regolatore della cromatina di tipo COMPASS che catalizza la mono- e di-metilazione di H3K4 negli enhancer, modellando i programmi trascrizionali. MLL3 coopera con i recettori nucleari e con fattori di trascrizione che determinano la linea cellulare per controllare il priming degli enhancer, la dinamica della RNA polimerasi II e le decisioni di identità cellulare durante lo sviluppo e la differenziazione. Attraverso i suoi effetti sull’accessibilità della cromatina e sugli elementi regolatori a lunga distanza, MLL3 influenza vie legate al metabolismo, all’infiammazione e alle risposte al danno al DNA. La disregolazione della funzione degli enhancer dipendente da Kmt2c/MLL3 è associata ad alterazioni delle reti di espressione genica osservate in molteplici contesti rilevanti per la malattia, incluso il rimodellamento epigenetico associato al cancro.

Le particelle di attivazione lentivirale MLL3 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Kmt2c in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale MLL3 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Kmt2c, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di MLL3. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Kmt2c e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.