MLL2 Plasmide Double Nickase (h): sc-401659-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- MLL2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il MLL2 Double Nickase Plasmid (h) e il MLL2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira KMT2D. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: MLL2 Antibody (2E1): sc-293217
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
MLL2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-401659-NIC | 20 µg | $410.00 |
KMT2D (MLL2) codifica una metiltransferasi delle lisine istoniche contenente un dominio SET, che catalizza principalmente la mono- e di-metilazione di H3K4 negli enhancer, a supporto dell’avvio della trascrizione e di programmi di espressione genica specifici del tipo cellulare. In quanto regolatore centrale dell’accessibilità della cromatina, MLL2 si integra con complessi di tipo COMPASS per coordinare il “priming” degli enhancer, l’impegno di linea e la trascrizione responsiva ai segnali lungo vie di sviluppo e immunitarie. L’alterazione di KMT2D perturba il controllo epigenetico della differenziazione e delle reti trascrizionali responsivе al danno al DNA, contribuendo a una modifica dell’identità cellulare e della regolazione del genoma. Studi genetici ed epigenomici hanno collegato la disregolazione di KMT2D a sindromi dello sviluppo e a diversi fenotipi di rimodellamento della cromatina associati al cancro, rendendolo un bersaglio chiave nella genomica funzionale.
MLL2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus KMT2D nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di KMT2D. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di KMT2D. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con KMT2D interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.