Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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MLH1 Plasmide Double Nickase (h): sc-401276-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- MLH1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il MLH1 Double Nickase Plasmid (h) e il MLH1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira MLH1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: MLH1 Antibody (B-12): sc-271978
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
MLH1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-401276-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MLH1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401276-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MLH1 codifica una proteina chiave del sistema di riparazione degli appaiamenti errati del DNA (MMR), che forma eterodimeri con PMS2 per coordinare l’attività endonucleasica di MutLα durante la riparazione post-replicativa. Riconoscendo ed elaborando mismatch base–base e loop di inserzione/delezione a valle dei complessi MutS, MLH1 contribuisce a mantenere la stabilità del genoma e a contenere il carico mutazionale durante la replicazione e la ricombinazione del DNA. L’alterazione della funzione di MLH1 è fortemente associata all’instabilità dei microsatelliti e a una segnalazione modificata della risposta al danno al DNA, collegando questa via alla predisposizione al cancro e all’evoluzione tumorale in diversi tessuti. MLH1 è quindi ampiamente studiato in modelli di fedeltà della replicazione, riparazione associata alla cromatina e fenotipi cellulari guidati dalle mutazioni.
MLH1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MLH1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MLH1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MLH1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MLH1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.