MKP-1/DUSP1 Plasmide Double Nickase (m): sc-422507-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- MKP-1/DUSP1 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il MKP-1/DUSP1 Double Nickase Plasmid (m) e il MKP-1/DUSP1 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Dusp1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: MKP-1/DUSP1 Antibody (E-6): sc-373841
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
MKP-1/DUSP1 Plasmide Double Nickase (m) | sc-422507-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MKP-1/DUSP1 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-422507-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Dusp1 codifica la fosfatasi-1 delle chinasi attivate da mitogeni (MKP-1/DUSP1), una fosfatasi a doppia specificità che defosforila e inattiva le MAPK, incluse ERK, JNK e p38. In quanto regolatore immediato-early inducibile, MKP-1 fornisce un controllo a feedback negativo della segnalazione indotta da stress e citochine, modellando programmi trascrizionali legati a infiammazione, apoptosi e progressione del ciclo cellulare. Nelle cellule murine, Dusp1 è comunemente studiato in vie a valle di ligandi dei TLR, fattori di crescita e stress ossidativo, dove limita ampiezza e durata dell’attivazione delle MAPK. Un’attività di DUSP1 deregolata è stata associata a fenotipi infiammatori e a risposte allo stress alterate, rilevanti per modelli di disregolazione immunitaria, malattie metaboliche e biologia del cancro.
MKP-1/DUSP1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Dusp1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Dusp1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Dusp1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Dusp1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.