MK Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-402064-LAC

Il gene umano **MDK** codifica la midkine (MK), un fattore di crescita secreto e legante l’eparina che modula la proliferazione, la sopravvivenza e la migrazione cellulare, nonché la crescita dei neuriti durante lo sviluppo e la riparazione dei tessuti. MK interagisce con proteoglicani di superficie e complessi recettoriali per attivare programmi di segnalazione che includono MAPK/ERK, PI3K–AKT e JAK/STAT, influenzando le risposte infiammatorie, i processi angiogenici e il rimodellamento della matrice extracellulare. Un’espressione deregolata di MDK è stata riportata in molteplici contesti patologici, dove risulta associata ad alterazioni delle interazioni tumore–stroma, al reclutamento di cellule immunitarie e a risposte neuroinfiammatorie o legate a danno tissutale. Queste caratteristiche rendono MDK un utile nodo molecolare per studiare le transizioni di stato cellulare e la segnalazione del microambiente nella biologia del cancro, nelle neuroscienze e nella ricerca incentrata sull’infiammazione.

Le particelle di attivazione lentivirale MK (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di MDK in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale MK (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione MDK, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di MK. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo MDK e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.