MK Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421609

Panoramica

Mdk codifica la midchina (MK), un fattore di crescita secreto legante l’eparina che regola la proliferazione, la sopravvivenza e la migrazione cellulare, nonché la crescita dei neuriti durante lo sviluppo e il rimodellamento tissutale. MK trasduce segnali attraverso proteoglicani di superficie e complessi recettoriali, modulando vie legate a MAPK/ERK, PI3K/AKT e alle reti di chemochine infiammatorie, con effetti su angiogenesi e interazioni con la matrice extracellulare. Nei modelli murini, un’alterata espressione di Mdk è associata a un reclutamento disregolato delle cellule immunitarie e a risposte di riparazione anomale, risultando rilevante per studi su infiammazione, fibrosi e segnalazione stromale associata ai tumori. MK contribuisce inoltre al patterning del sistema nervoso e alle risposte al danno, rendendola un nodo utile per indagare processi neuroinfiammatori e rigenerativi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MK (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Mdk in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Mdk insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Mdk a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MK.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Mdk per lo studio della segnalazione di MK, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Mdk critici per la funzione di MK
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Mdk per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal MK CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal MK CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Mdk. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal MK Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR MK (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Mdk per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Mdk definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.