Mitofilin Plasmide Double Nickase (m): sc-429376-NIC

Immt codifica la Mitofilina, un componente centrale del sistema di organizzazione della membrana interna mitocondriale (MICOS), che mantiene l’architettura delle giunzioni delle creste e supporta la corretta curvatura della membrana interna. La Mitofilina coordina l’assemblaggio dei complessi della catena respiratoria, influenza l’efficienza della fosforilazione ossidativa e contribuisce alla dinamica mitocondriale, alla proteostasi e alla segnalazione dell’apoptosi. Nelle cellule di topo, l’alterazione di Immt è comunemente associata a ultrastruttura mitocondriale modificata, bioenergetica compromessa ed effetti secondari su vie di risposta allo stress, come la segnalazione integrata dello stress e la mitofagia. Queste funzioni rendono Immt un bersaglio frequente negli studi sui meccanismi delle malattie mitocondriali, nei modelli di neurodegenerazione, nella disfunzione cardiometabolica e in contesti in cui il rimodellamento delle creste influenza l’omeostasi cellulare.

Mitofilin Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Immt nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Immt. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Immt. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Immt interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.