MITF Plasmide Double Nickase (h): sc-400401-NIC

Il fattore di trascrizione associato alla microftalmia (MITF) è un regolatore basic helix–loop–helix leucine zipper che controlla la specificazione di linea e l'omeostasi nei melanociti e in altre cellule derivate dalla cresta neurale. Si lega ai motivi E-box per coordinare programmi trascrizionali che governano la melanogenesi, la pigmentazione, la biogenesi degli organelli correlati ai lisosomi, la proliferazione, la differenziazione e la sopravvivenza, integrando segnali provenienti da vie quali MAPK/ERK, WNT/β-catenina e cAMP/PKA. MITF contribuisce inoltre alle risposte allo stress cellulare e all'adattamento metabolico attraverso la regolazione dell'autofagia e delle reti geniche endolisosomiali. Un'attività o un'espressione deregolata di MITF è associata a disturbi della pigmentazione ed è spesso studiata nel contesto della biologia del melanoma, inclusi il cambio di stato delle cellule tumorali, l'invasione e i programmi trascrizionali associati alla resistenza.

MITF Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MITF nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MITF. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MITF. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MITF interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.