Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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MITF Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m2): sc-421654-KO-2
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- MITF Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m2) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico MITF, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: MITF Antibody (D-9): sc-515925
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
MITF Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m2) | sc-421654-KO-2 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Mitf codifica il fattore di trascrizione associato alla microftalmia (MITF), un regolatore bHLH-LZ (basic helix-loop-helix con cerniera a leucina) che coordina la specificazione di linea e i programmi di differenziamento nei melanociti e in tipi cellulari correlati derivati dalla cresta neurale. MITF controlla reti trascrizionali che regolano la pigmentazione, la biogenesi dei melanosomi, la progressione del ciclo cellulare e la sopravvivenza, integrando input di segnalazione come le vie MAPK/ERK e cAMP/CREB. Nei modelli murini, un’attività alterata di Mitf influisce sullo sviluppo dei melanociti, sui fenotipi pigmentari e su funzioni immuno-correlate nei mastociti, collegando il gene a studi meccanicistici sulla melanogenesi e sulla plasticità di linea. La disregolazione dei programmi dipendenti da MITF è ampiamente utilizzata per investigare vie rilevanti per la biologia del melanoma, inclusi il cambio di stato di differenziamento e le risposte allo stress.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MITF (m2) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Mitf in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Mitf insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Mitf a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MITF.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Mitf per lo studio della segnalazione di MITF, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Mitf critici per la funzione di MITF
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Mitf per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal MITF CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal MITF CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Mitf. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal MITF Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR MITF (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Mitf per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Mitf definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.