Plasmide Double Nickase (h) MIS: sc-400715-NIC

L’hormone anti-müllérienne (AMH), également appelée substance inhibitrice müllérienne (MIS), est une glycoprotéine de la superfamille TGF-β qui transmet son signal via AMHR2, en association avec des récepteurs de type I, pour activer des programmes transcriptionnels dépendants de SMAD1/5/8. Chez l’être humain, l’AMH/MIS régule des processus clés du développement et de la reproduction, notamment la régression des canaux de Müller chez l’embryon mâle ainsi que la modulation de la folliculogenèse et de la réserve ovarienne chez la femme. Sa signalisation s’articule avec la régulation plus large, par les voies BMP/TGF-β, des décisions de destinée cellulaire, de la prolifération et de la différenciation au sein des tissus reproducteurs. Une expression dérégulée de l’AMH ou des défauts de la voie de son récepteur ont été associés à des troubles du développement sexuel et à des phénotypes d’endocrinologie de la reproduction, et l’altération de l’activité de la voie AMH est étudiée dans divers contextes de maladies des gonades et du tractus reproducteur.

MIS Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus AMH dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de AMH. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de AMH. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de AMH.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.