MIS CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419100

概要

Amhは抗ミュラー管ホルモン（MIS）をコードしており、MISはTGF-βスーパーファミリーに属する糖タンパク質です。MISは、雄の胚発生期におけるミュラー管の退縮を制御する因子として最もよく知られています。MISは主にAMHR2とI型受容体を介してシグナルを伝達し、SMAD1/5/8依存的な転写プログラムを活性化することで、生殖路の形態形成や性腺機能を制御します。卵巣では、AMHが原始卵胞の動員（リクルート）やFSH応答性を調節することで卵胞形成に寄与し、内分泌調節や生殖能に関連する表現型と結び付いています。AMH/MISシグナルの変化は、性分化疾患、顆粒膜細胞の生物学、ならびに組織分化を制御する経路の研究に用いられてきました。

MIS CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるAmh遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Amh内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Amhのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、MISタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、MISシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Amh欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• MISの機能に不可欠なAmhエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Amhゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• MIS CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびMIS CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Amh遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  MIS HDRプラスミド（m）および MIS HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAmhホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAmh標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。