Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
MIS Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400715
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- MIS Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico MIS, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: MIS Antibody (B-11): sc-166752
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
MIS Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-400715 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
L’ormone anti-Mülleriano (AMH), noto anche come sostanza inibente Mülleriana (MIS), è una glicoproteina della superfamiglia del TGF-β che segnala principalmente attraverso AMHR2 e, a valle, SMAD1/5/8 per regolare lo sviluppo del tratto riproduttivo e la funzione gonadica. Nell’ovaio, l’AMH prodotto dalle cellule della granulosa modula il reclutamento dei follicoli e la risposta all’FSH, plasmando l’equilibrio tra crescita follicolare e quiescenza. Nel testicolo, il MIS prodotto dalle cellule del Sertoli induce la regressione dei dotti di Müller durante la differenziazione sessuale maschile. La deregolazione della segnalazione AMH/MIS e le alterazioni della sua espressione sono oggetto di studio nei disordini dello sviluppo sessuale, nella fisiologia ovarica e nella biologia tumorale correlata al sistema endocrino.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MIS (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene AMH in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del AMH insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto AMH a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MIS.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di AMH per lo studio della segnalazione di MIS, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni AMH critici per la funzione di MIS
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di AMH per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal MIS CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal MIS CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus AMH. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal MIS Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR MIS (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia AMH per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio AMH definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.