MIS CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400715

概要

抗ミュラー管ホルモン（AMH）は、ミュラー管抑制物質（MIS）とも呼ばれるTGF-βスーパーファミリーに属する糖タンパク質で、主としてAMHR2および下流のSMAD1/5/8を介してシグナルを伝達し、生殖管の発生と性腺機能を調節する。卵巣では、顆粒膜細胞が産生するAMHが卵胞のリクルート（動員）やFSH応答性を調整し、卵胞の成長と休止のバランスを形作る。精巣では、セルトリ細胞由来のMISが男性の性分化過程においてミュラー管の退縮を誘導する。AMH/MISシグナル伝達の破綻や発現変化は、性分化疾患、卵巣生理、ならびに内分泌関連腫瘍の生物学において研究されている。

MIS CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるAMH遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、AMH内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、AMHのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、MISタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、MISシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、AMH欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• MISの機能に不可欠なAMHエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、AMHゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• MIS CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびMIS CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、AMH遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  MIS HDRプラスミド（h）および MIS HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAMHホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAMH標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。