MIP-2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422851

Panoramica

Cxcl2 codifica la macrophage inflammatory protein-2 (MIP-2), una chemochina CXC che segnala principalmente attraverso CXCR2 per promuovere la chemiotassi e l’attivazione dei neutrofili e di altre cellule mieloidi. MIP-2 è indotta rapidamente da stimoli dell’immunità innata e da citochine pro-infiammatorie, collegando le vie di segnalazione NF-κB e MAPK alle reti di citochine e chemochine che coordinano il reclutamento leucocitario. Questo asse contribuisce alle risposte infiammatorie acute, all’attivazione vascolare e al rimodellamento tissutale in contesti quali infezione, danno sterile ed endotossiemia. Una segnalazione CXCL2/MIP-2 deregolata è spesso utilizzata come indicatore del carico infiammatorio in modelli di infiammazione polmonare, artrite, colite e infiammazione associata al tumore.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MIP-2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Cxcl2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Cxcl2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Cxcl2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MIP-2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Cxcl2 per lo studio della segnalazione di MIP-2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Cxcl2 critici per la funzione di MIP-2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Cxcl2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal MIP-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal MIP-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Cxcl2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal MIP-2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR MIP-2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Cxcl2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Cxcl2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.