Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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MGMT Plasmide Double Nickase (h): sc-400720-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- MGMT Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il MGMT Double Nickase Plasmid (h) e il MGMT Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira MGMT. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: MGMT Antibody (E-1): sc-166528
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
MGMT Plasmide Double Nickase (h) | sc-400720-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MGMT Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400720-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
L’O6-metilguanina-DNA metiltransferasi (MGMT) è un enzima di riparazione diretta del DNA che rimuove gli addotti alchilici dalla posizione O6 della guanina trasferendo la lesione a una cisteina del sito attivo in una reazione “suicida” a uso singolo. Questa attività protegge l’integrità genomica prevenendo errori di appaiamento e rotture a doppio filamento associate alla replicazione che possono insorgere dalla persistenza di lesioni di O6-alchilguanina. MGMT agisce all’interno della più ampia rete di risposta al danno e riparazione del DNA, che interagisce con lo stress replicativo e con l’elaborazione del danno da alchilazione dipendente dal mismatch repair. L’alterata espressione di MGMT o la metilazione del promotore sono ampiamente studiate come determinanti delle risposte cellulari al danno alchilante e sono rilevanti per la biologia tumorale, le firme mutazionali e il crosstalk tra vie di riparazione del DNA.
MGMT Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MGMT nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MGMT. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MGMT. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MGMT interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.