mGluR-8a/b/c Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420695

Panoramica

Grm8 codifica il recettore metabotropico del glutammato 8 (mGluR-8a/b/c), un GPCR del gruppo III che si accoppia principalmente alle proteine Gi/o per ridurre l’attività dell’adenilato ciclasi, modulare la segnalazione cAMP/PKA e regolare il rilascio presinaptico dei neurotrasmettitori. L’attività di mGluR8 influenza la trasmissione e la plasticità sinaptica modulando la funzione dei canali ionici e la probabilità di rilascio delle vescicole, integrando la segnalazione glutamatergica attraverso i circuiti neurali. Nel topo, Grm8 è studiato nel contesto dell’equilibrio eccitatorio/inibitorio e dei meccanismi a livello di circuito che plasmano l’elaborazione sensoriale, l’apprendimento e i comportamenti responsivi allo stress. La disregolazione della segnalazione dei recettori del glutammato, inclusi i mGluR del gruppo III, è spesso oggetto di studio per il suo contributo a fenotipi neuroevolutivi e neuropsichiatrici in modelli sperimentali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO mGluR-8a/b/c (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Grm8 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Grm8 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Grm8 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina mGluR-8a/b/c.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Grm8 per lo studio della segnalazione di mGluR-8a/b/c, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Grm8 critici per la funzione di mGluR-8a/b/c
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Grm8 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal mGluR-8a/b/c CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal mGluR-8a/b/c CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Grm8. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal mGluR-8a/b/c Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR mGluR-8a/b/c (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Grm8 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Grm8 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.