MFSD2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-429366

Panoramica

Mfsd2a codifica MFSD2, un trasportatore della superfamiglia dei major facilitator implicato nella gestione dei lipidi e nell’omeostasi di membrana, con ruoli ben documentati nella biologia endoteliale e nella fisiologia del tessuto nervoso. Nella barriera emato-encefalica, MFSD2 contribuisce alla regolazione della transcitosi e influenza il trasporto di lisofosfolipidi come gli acidi grassi omega-3 legati a LPC, con conseguenze sull’integrità dell’unità neurovascolare e sulla funzione neuronale. Un’alterazione dell’attività di MFSD2A è stata associata a proprietà di barriera compromesse, fenotipi neuro-sviluppativi e cambiamenti nella segnalazione infiammatoria collegati a stress endoteliale e metabolico. Nei modelli murini, Mfsd2a rappresenta un punto di accesso sperimentalmente maneggevole per studiare la segnalazione accoppiata al trasporto lipidico, il controllo della permeabilità vascolare e l’adattamento metabolico specifico di tessuto.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MFSD2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Mfsd2a in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Mfsd2a insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Mfsd2a a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MFSD2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Mfsd2a per lo studio della segnalazione di MFSD2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Mfsd2a critici per la funzione di MFSD2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Mfsd2a per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal MFSD2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal MFSD2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Mfsd2a. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal MFSD2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR MFSD2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Mfsd2a per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Mfsd2a definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.