MFSD2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-405672-ACT

MFSD2A codifica MFSD2, un trasportatore sodio-dipendente di lisofosfatidilcoline che media l’ingresso dell’acido docosaesaenoico (DHA) attraverso le barriere endoteliali, con un ruolo di primo piano a livello della barriera emato-encefalica. Regolando l’afflusso di lipidi e la composizione dei fosfolipidi di membrana, MFSD2A sostiene il neurosviluppo, il mantenimento dei neuroni e l’integrità della barriera, inserendosi al contempo in vie più ampie di trasporto lipidico e di omeostasi metabolica. MFSD2A contribuisce inoltre alla soppressione della transcitosi vescicolare nell’endotelio cerebrale, collegando la sua attività al controllo del traffico endoteliale e a una funzione di barriera “stretta”. Alterazioni dell’espressione o della funzione di MFSD2A sono state associate a fenotipi neuroevolutivi e a una permeabilità di barriera deregolata, rendendolo rilevante per studi sul metabolismo lipidico del SNC e sulla biologia endoteliale.

MFSD2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MFSD2A senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MFSD2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MFSD2A nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MFSD2A, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MFSD2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MFSD2A nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MFSD2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MFSD2 nelle cellule tumorali con espressione di MFSD2A silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.