Mfn2/Mitofusin 2 Plasmide Double Nickase (h): sc-400536-NIC

MFN2 codifica la GTPasi della membrana mitocondriale esterna Mitofusin 2 (Mfn2), un mediatore chiave della fusione mitocondriale e del rimodellamento della rete, che contribuisce a mantenere l’integrità del DNA mitocondriale, il potenziale di membrana e la capacità di fosforilazione ossidativa. Oltre alla fusione, Mfn2 partecipa ai siti di contatto tra reticolo endoplasmatico e mitocondri (MAM), modulando il trasferimento di Ca²⁺, lo scambio lipidico e le vie di segnalazione dello stress che coordinano il metabolismo cellulare e l’apoptosi. L’attività di MFN2 si interseca con i programmi di controllo qualità mitocondriale, inclusi la mitofagia e la risposta integrata allo stress, collegando la dinamica degli organelli all’adattamento bioenergetico. Una funzione deregolata di MFN2 è implicata nella neurodegenerazione e nelle neuropatie periferiche, ed è spesso studiata anche in contesti di disfunzione cardiometabolica, in cui morfologia e segnalazione mitocondriali alterate accompagnano lo stress cellulare.

Mfn2/Mitofusin 2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MFN2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MFN2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MFN2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MFN2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.