Mfn1/Mitofusin 1 Plasmide Double Nickase (m): sc-426545-NIC

Nel topo, Mfn1 codifica la mitofusina 1, una GTPasi correlata alla dinamina incorporata nella membrana mitocondriale esterna che promuove l’ancoraggio e la fusione dei mitocondri. MFN1 coordina l’architettura della rete mitocondriale, sostiene l’efficienza della fosforilazione ossidativa e contribuisce al mantenimento del DNA mitocondriale e all’adattamento allo stress attraverso i circuiti della dinamica mitocondriale. La sua attività si interseca con processi di controllo qualità come la mitofagia e la segnalazione dell’apoptosi, influenzando il potenziale di membrana, l’organizzazione delle creste e la comunicazione tra organelli. La deregolazione della fusione mediata da MFN1 è associata ad alterazioni della bioenergetica ed è spesso studiata nel contesto della neurodegenerazione, delle disfunzioni cardiometaboliche e delle transizioni di stato delle cellule tumorali, in cui il rimodellamento mitocondriale incide sul fenotipo.

Mfn1/Mitofusin 1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Mfn1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Mfn1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Mfn1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Mfn1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.