MFG-E8 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402282-ACT

Il gene umano **MFGE8** codifica per la milk fat globule‑EGF factor 8 (**MFG‑E8**), una glicoproteina secreta che si lega alla fosfatidilserina sulle cellule apoptotiche e le connette ai fagociti tramite integrine quali **αvβ3** e **αvβ5**, promuovendo l’efferocitosi e la risoluzione dell’infiammazione. Attraverso la regolazione della rimozione delle cellule apoptotiche, MFG‑E8 influenza la segnalazione dell’immunità innata, il rimodellamento tissutale e la polarizzazione dei macrofagi, con effetti a valle sul tono citochinico e sull’omeostasi della matrice extracellulare. L’attività di MFGE8 si interseca con programmi angiogenici e di riparazione delle ferite ed è spesso studiata nel contesto di infiammazione cronica, fibrosi e biologia del microambiente tumorale, dove una clearance difettosa o segnali stromali alterati possono contribuire a fenotipi associati alla malattia.

MFG-E8 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MFGE8 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MFG-E8 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MFGE8 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MFGE8, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MFG-E8. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MFGE8 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MFG-E8 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MFG-E8 nelle cellule tumorali con espressione di MFGE8 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.