METTL14 Plasmide Double Nickase (h): sc-406936-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- METTL14 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il METTL14 Double Nickase Plasmid (h) e il METTL14 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira METTL14. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
METTL14 Plasmide Double Nickase (h) | sc-406936-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
METTL14 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-406936-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
METTL14 codifica un componente centrale del complesso “writer” della metiltransferasi dell’RNA N6-metiladenosina (m6A), agendo in partnership con METTL3 e con proteine adattatrici come WTAP per depositare marcature m6A sull’mRNA e su altri RNA. Queste modifiche epitranscrittomiche regolano lo splicing dell’RNA, l’esportazione nucleare, la stabilità e la traduzione, plasmando così programmi di espressione genica che controllano le decisioni sul destino cellulare, la proliferazione e le risposte allo stress. La segnalazione m6A dipendente da METTL14 interseca vie che governano la risposta al danno al DNA, la staminalità e la regolazione dell’immunità innata, attraverso modifiche del turnover dei trascritti e dell’output traduzionale. Un’attività o un’espressione deregolata di METTL14 è stata collegata a un controllo aberrante, di tipo epigenetico, di reti oncogeniche e dello sviluppo, rendendola un bersaglio frequente negli studi meccanicistici di biologia tumorale e differenziamento.
METTL14 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus METTL14 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di METTL14. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di METTL14. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con METTL14 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.