Metallothionein 2A Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-410889-LAC

MT2A codifica la metallotioneina 2A, una proteina ricca di cisteina che lega i metalli e che tampona zinco e rame intracellulari, contribuendo alla detossificazione di metalli tossici come cadmio e mercurio. Regolando l’omeostasi degli ioni metallici e l’equilibrio redox, MT2A influenza le risposte allo stress ossidativo, la funzione mitocondriale e i programmi trascrizionali mediati da fattori dipendenti dai metalli. L’espressione di MT2A è sensibile a segnali infiammatori e di stress, incluse le vie antiossidanti guidate da NRF2, e può modulare l’apoptosi e la sopravvivenza cellulare in condizioni di stress tossico o metabolico. Alterazioni dell’attività e dell’espressione di MT2A sono state associate alla biologia dei tumori, a disturbi metabolici ed epatici e a meccanismi neurodegenerativi in cui la disomeostasi dei metalli e il danno ossidativo sono rilevanti.

Le particelle di attivazione lentivirale Metallothionein 2A (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di MT2A in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Metallothionein 2A (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione MT2A, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Metallothionein 2A. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo MT2A e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.