Menin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402759

Panoramica

MEN1 codifica la menina, una proteina scaffold prevalentemente nucleare che coordina la regolazione trascrizionale e lo stato della cromatina attraverso interazioni con modificatori degli istoni e fattori di trascrizione specifici per sequenza. La menina è strettamente legata al controllo epigenetico dei programmi di espressione genica che governano la progressione del ciclo cellulare, la differenziazione e la stabilità del genoma, incluse vie associate ai complessi MLL/COMPASS e ad altri regolatori associati alla cromatina. L’alterazione di MEN1 perturba l’omeostasi delle linee endocrine e le reti trascrizionali implicate nella biologia dei geni oncosoppressori. In quanto regolatore dipendente dal contesto, la menina è ampiamente studiata per i suoi effetti sui tessuti produttori di ormoni, sulle risposte al danno al DNA e sulla fedeltà della trascrizione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Menin (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MEN1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MEN1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MEN1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Menin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MEN1 per lo studio della segnalazione di Menin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni MEN1 critici per la funzione di Menin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MEN1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Menin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Menin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MEN1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Menin Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Menin (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MEN1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MEN1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.