melanotransferrin Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404111-ACT

Il gene umano **MELTF** codifica la melanotransferrina, una glicoproteina legante il ferro associata alla membrana, implicata nella gestione cellulare del ferro e nel traffico correlato alla transferrina. Oltre al trasporto dei metalli, la melanotransferrina è stata collegata alla regolazione dell’adesione cellulare, della migrazione e dei processi endocitici, con un coinvolgimento in vie che modellano la dinamica di membrana e le interazioni extracellulari. Un’alterata espressione di **MELTF** è stata riportata in diversi contesti rilevanti per la malattia, tra cui la biologia dei tumori e la neuroinfiammazione, dove sono frequenti cambiamenti nell’omeostasi del ferro e nei programmi di motilità cellulare. In quanto molecola associata alla superficie, la melanotransferrina è anche utilizzata come marcatore per analizzare l’eterogeneità fenotipica in modelli cellulari umani.

melanotransferrin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MELTF senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

melanotransferrin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MELTF nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MELTF, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di melanotransferrin. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MELTF nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da melanotransferrin nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via melanotransferrin nelle cellule tumorali con espressione di MELTF silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.