MEK kinase-2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403653-ACT

MAP3K2 codifica la MEK chinasi-2, una MAP chinasi chinasi chinasi (MAP3K) che trasduce i segnali di stress e delle citochine a monte nelle cascate MAPK a valle. MEK chinasi-2 integra segnali provenienti da recettori e piccole GTPasi per modulare gli output di segnalazione di ERK, JNK e p38, plasmando programmi trascrizionali che controllano proliferazione, differenziamento, migrazione e risposte infiammatorie. Grazie al suo ruolo nella dinamica della rete MAPK e nell’espressione genica dipendente dal segnale, MAP3K2 viene spesso studiato in contesti di segnalazione oncogenica, regolazione immunitaria e adattamento cellulare allo stress. Un’attività di via disregolata che coinvolge MAP3K2 è stata associata ad alterata responsività ai fattori di crescita e a fenotipi legati all’infiammazione, rilevanti per la ricerca meccanicistica sulle malattie.

MEK kinase-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MAP3K2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MEK kinase-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MAP3K2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MAP3K2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MEK kinase-2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MAP3K2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MEK kinase-2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MEK kinase-2 nelle cellule tumorali con espressione di MAP3K2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.