MEK Kinase 1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401107-ACT

MAP3K1 umano codifica la MEK Kinase 1 (MEKK1), una MAP chinasi chinasi chinasi (MAP3K) serina/treonina che integra segnali provenienti da fattori di crescita, citochine e stress cellulare per regolare a valle le cascate MAPK. MEKK1 collega segnali a monte alle vie MKK4/7–JNK e MKK3/6–p38, influenzando programmi trascrizionali che controllano proliferazione, apoptosi, differenziamento e risposte infiammatorie. Grazie ai suoi ruoli regolatori nelle vie delle chinasi attivate dallo stress e nel rimodellamento del citoscheletro, MAP3K1 è spesso studiato in contesti di riprogrammazione anomala delle reti di segnalazione. Un’attività alterata di MAP3K1 è stata associata, in ambito di ricerca meccanicistica, a una deregolazione dell’output della via MAPK rilevante per oncologia, disturbi dello sviluppo e fenotipi di segnalazione immunitaria.

MEK Kinase 1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MAP3K1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MEK Kinase 1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MAP3K1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MAP3K1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MEK Kinase 1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MAP3K1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MEK Kinase 1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MEK Kinase 1 nelle cellule tumorali con espressione di MAP3K1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.