Plásmido CRISPR de Activación (m) Meis2: sc-421710-ACT

MEIS2 (Meis homeobox 2) es un factor de transcripción con dominio homeobox de la clase TALE que coopera con las proteínas PBX y HOX para regular la actividad de potenciadores (enhancers) y programas de expresión génica específicos de linaje durante el desarrollo embrionario. En el ratón, Meis2 contribuye al patrón y la diferenciación en derivados de la cresta neural, la morfogénesis craneofacial, el desarrollo de las extremidades y del corazón, y la maduración de poblaciones neuronales seleccionadas, integrando señales de redes de señalización del desarrollo como el ácido retinoico y los circuitos transcripcionales regulados por HOX. Al controlar la especificación del destino celular y los procesos morfogenéticos, las alteraciones en la dosis de MEIS2 o una salida transcripcional desregulada son relevantes para fenotipos congénitos del desarrollo y para la biología del neurodesarrollo. Por ello, Meis2 se estudia con frecuencia en modelos de diferenciación, organogénesis y arquitectura de redes transcripcionales.

Meis2 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Meis2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Meis2 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Meis2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Meis2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Meis2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Meis2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Meis2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Meis2 en células tumorales con expresión de Meis2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.