megalin/LRP2 Lentiviral Activation Particles (h): sc-401094-LAC

LRP2 kodiert Megalin, ein großes endozytotisches Mitglied der LDL‑Rezeptorfamilie, das an der Plasmamembran als Multiliganden‑Scavenger und Transporter fungiert. Megalin vermittelt die clathrinabhängige Internalisierung und den Transport vielfältiger Fracht, darunter vitaminbindende Proteine, Lipoproteine und Morphogene, und prägt damit die epitheliale Rückresorption sowie die Nährstoffhomöostase. Über Interaktionen mit Adapterproteinen und Korezeptoren beeinflusst LRP2 die endosomale Sortierung, das Recycling von Rezeptoren und nachgeschaltete Signalnetzwerke wie Sonic‑hedgehog‑ und TGF‑β‑assoziierte Signalwege. Eine veränderte Expression oder Funktion von LRP2 wurde mit Entwicklungsphänotypen und gewebespezifischen Funktionsstörungen in Verbindung gebracht, was seine Nutzung als mechanistisches Ziel in Studien zur Epithelbiologie und zum rezeptorvermittelten Transport unterstützt.

megalin/LRP2 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente LRP2-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

megalin/LRP2 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der LRP2-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen megalin/LRP2-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen LRP2-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.