MEF-2A Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400484-ACT

MEF2A codifica il fattore di trascrizione MEF-2A, un membro della famiglia myocyte enhancer factor 2 che si lega agli elementi MEF2 per regolare programmi di espressione genica specifici di tessuto. MEF-2A integra la segnalazione calcio-dipendente e le vie MAPK, coordinando risposte trascrizionali che influenzano la miogenesi, la regolazione dei geni dipendente dall’attività neuronale e le funzioni vascolari/endoteliali. Attraverso interazioni con cofattori come le HDAC di classe IIa, MEF-2A mette in relazione lo stato della cromatina con una trascrizione responsiva agli stimoli e con la differenziazione cellulare. Un’alterata attività di MEF2A è stata associata a fenotipi cardiovascolari e di neurosviluppo, supportandone l’uso come nodo per studi meccanicistici del controllo trascrizionale in vie rilevanti per la patologia.

MEF-2A Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MEF2A senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MEF-2A Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MEF2A nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MEF2A, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MEF-2A. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MEF2A nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MEF-2A nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MEF-2A nelle cellule tumorali con espressione di MEF2A silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.