Med30 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406399

Descripción general

MED30 codifica una subunidad central del complejo Mediator que acopla factores de transcripción específicos de secuencia con la ARN polimerasa II, lo que permite el inicio regulado de la transcripción y la expresión génica dependiente del promotor. Med30 contribuye a la integridad estructural de Mediator y respalda programas transcripcionales coordinados que gobiernan la progresión del ciclo celular, la diferenciación y la señalización de respuesta al estrés. Dado que Mediator integra múltiples entradas de señalización, la alteración de MED30 puede modificar redes transcripcionales implicadas en el control proliferativo y la homeostasis celular. La función desregulada de Mediator se asocia con frecuencia a estados de expresión génica relevantes para enfermedades, lo que convierte a MED30 en un nodo útil para estudiar los circuitos transcripcionales en células humanas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Med30 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen MED30 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del MED30 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de MED30 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Med30.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en MED30 para la investigación de la señalización de Med30, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de MED30 críticos para la función de Med30
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de MED30 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Med30 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Med30 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus MED30. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Med30 (h) y el plásmido HDR Med30 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología MED30 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana MED30 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.