MECL-1 Plasmide Double Nickase (h2): sc-402101-NIC-2

Il gene umano PSMB10 codifica la subunità beta del proteasoma di tipo 10 (MECL-1), un componente catalitico inducibile dell’immunoproteasoma che sostituisce le subunità β costitutive per rimodellare le preferenze di taglio proteolitico durante la segnalazione infiammatoria. MECL-1 sostiene il turnover proteico mediato dal sistema ubiquitina–proteasoma e potenzia l’elaborazione degli antigeni per l’MHC di classe I, collegando le risposte guidate dagli interferoni alla sorveglianza immunitaria adattativa e alla modulazione dei programmi di proteostasi associati a NF-κB. La disregolazione della composizione o dell’attività dell’immunoproteasoma è implicata in un’alterata presentazione dell’antigene e nell’attivazione immunitaria cronica osservate in contesti di autoimmunità, infezione ed evasione immunitaria tumorale. L’editing genetico di PSMB10 consente di interrogare i meccanismi dei repertori peptidici dipendenti dall’immunoproteasoma, il controllo di qualità del proteoma sotto stress da citochine e il rimodellamento delle vie immunitarie in modelli cellulari umani.

MECL-1 Il plasmide Double Nickase (h2) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PSMB10 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PSMB10. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PSMB10. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PSMB10 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.