MDM2 Plasmide Double Nickase (h): sc-400045-NIC

MDM2 codifica una ligasi E3 dell’ubiquitina che funge da regolatore negativo centrale di TP53, ubiquitinando p53 e promuovendone l’esportazione nucleare e la degradazione proteasomiale. Attraverso questo circuito di feedback, MDM2 modella le risposte cellulari al danno al DNA e allo stress oncogenico, influenzando i checkpoint del ciclo cellulare, l’apoptosi e la senescenza tramite il programma trascrizionale di p53. MDM2 interagisce anche con la segnalazione RB/E2F e con le vie delle chinasi attivate dallo stress, integrando i segnali dei fattori di crescita con la sorveglianza del genoma. Un’espressione o un’attività deregolate di MDM2 sono frequentemente associate a un controllo compromesso della via di p53 e sono ampiamente studiate nel contesto della biologia tumorale, dell’instabilità genomica e dei meccanismi di risposta alle terapie.

MDM2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MDM2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MDM2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MDM2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MDM2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.