MDH2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402825

Panoramica

MDH2 codifica la malato deidrogenasi mitocondriale 2, un enzima chiave NAD⁺-dipendente che catalizza la conversione reversibile del malato in ossalacetato nel ciclo dell’acido tricarbossilico (TCA). Regolando la produzione mitocondriale di NADH e la disponibilità di ossalacetato, MDH2 contribuisce a coordinare il metabolismo ossidativo, l’anaplerosi e l’equilibrio redox, e sostiene i flussi biosintetici accoppiati alla respirazione mitocondriale. La funzione di MDH2 è strettamente connessa alla riprogrammazione metabolica, alla gestione delle specie reattive dell’ossigeno e ai percorsi di controllo della qualità mitocondriale che determinano la fitness cellulare in condizioni di stress da carenza di nutrienti o ipossia. Alterazioni dell’attività o dell’espressione di MDH2 sono state implicate in fenotipi rilevanti per la malattia associati a disfunzione mitocondriale, inclusi squilibri neurometabolici e dipendenze metaboliche associate ai tumori.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MDH2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MDH2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MDH2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MDH2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MDH2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MDH2 per lo studio della segnalazione di MDH2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni MDH2 critici per la funzione di MDH2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MDH2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal MDH2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal MDH2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MDH2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal MDH2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR MDH2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MDH2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MDH2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.