MCT8 Plasmide Double Nickase (h): sc-403824-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- MCT8 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il MCT8 Double Nickase Plasmid (h) e il MCT8 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira SLC16A2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
MCT8 Plasmide Double Nickase (h) | sc-403824-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MCT8 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403824-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SLC16A2 codifica per il trasportatore di monocarbossilati 8 (MCT8), un trasportatore degli ormoni tiroidei ad alta affinità e altamente specifico che media l’ingresso e l’efflusso cellulari della triiodotironina (T3) e della tiroxina (T4). Regolando la disponibilità intracellulare degli ormoni tiroidei, MCT8 influenza la segnalazione mediata dai recettori degli ormoni tiroidei e i programmi trascrizionali a valle che controllano lo sviluppo neurologico, la differenziazione neuronale e l’omeostasi metabolica. L’attività di MCT8 si integra con i processi di trasporto di membrana e con la segnalazione endocrina, contribuendo a determinare un’azione tessuto-specifica degli ormoni tiroidei. Varianti patogene di SLC16A2 sono associate a gravi fenotipi neuroevolutivi e a un’alterata distribuzione degli ormoni tiroidei, rendendolo un bersaglio chiave per studi meccanicistici sul trasporto e sulla segnalazione degli ormoni tiroidei.
MCT8 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SLC16A2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SLC16A2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SLC16A2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SLC16A2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.