MCT12 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407365

Panoramica

SLC16A12 codifica il trasportatore di monocarbossilati 12 (MCT12), un trasportatore di membrana della famiglia dei solute carrier 16 implicato nel movimento transmembrana di piccoli acidi organici e metaboliti correlati che contribuiscono all’omeostasi metabolica cellulare. Influenzando la disponibilità dei substrati attraverso le membrane, MCT12 può intersecarsi con vie che regolano la gestione di lattato/piruvato, l’equilibrio redox e l’accoppiamento metabolico tra compartimenti cellulari. Alterazioni della funzione di SLC16A12 sono state associate a fenotipi oculari, inclusa la cataratta e cambiamenti nella fisiologia del cristallino, a sostegno della sua rilevanza per studi sul trasporto epiteliale, il flusso di metaboliti e lo stress metabolico specifico di tessuto. Queste caratteristiche rendono SLC16A12 un bersaglio utile per analizzare come il trasporto dei monocarbossilati si integri con il metabolismo energetico cellulare e con le funzioni di barriera/epiteliali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MCT12 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SLC16A12 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SLC16A12 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SLC16A12 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MCT12.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SLC16A12 per lo studio della segnalazione di MCT12, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SLC16A12 critici per la funzione di MCT12
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SLC16A12 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal MCT12 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal MCT12 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SLC16A12. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal MCT12 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR MCT12 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SLC16A12 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SLC16A12 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.