MCP-2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422848

Panoramica

Il gene murino **Ccl8** codifica la **monocyte chemoattractant protein-2 (MCP-2)**, una chemochina CC che coordina il traffico dei leucociti attraverso la segnalazione mediata da recettori chemiokinici come **CCR1, CCR2 e CCR5**. MCP-2 modella la chemiotassi infiammatoria, regola il reclutamento delle cellule mieloidi e contribuisce al dialogo tra compartimenti immunitari innati e adattativi all’interno di tessuti danneggiati o infetti. L’espressione di **Ccl8** è comunemente indotta a valle di programmi guidati da **NF-κB** e da citochine, collegando il riconoscimento dei patogeni e la segnalazione infiammatoria alla migrazione cellulare. Un’attività deregolata di MCP-2 è stata implicata in stati infiammatori cronici, fenotipi autoimmuni e infiltrazione immunitaria associata ai tumori, rendendola rilevante per studi meccanicistici dei microambienti immunitari.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MCP-2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ccl8 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ccl8 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ccl8 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MCP-2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ccl8 per lo studio della segnalazione di MCP-2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ccl8 critici per la funzione di MCP-2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ccl8 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal MCP-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal MCP-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ccl8. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal MCP-2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR MCP-2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ccl8 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ccl8 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.