MCART1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-417948

Panoramica

SLC25A51 codifica MCART1, un trasportatore della membrana mitocondriale interna implicato nel mantenimento del metabolismo redox mitocondriale, facilitando il trasporto di NAD nella matrice. Influenzando la disponibilità di NAD per la fosforilazione ossidativa, per le reazioni delle deidrogenasi collegate al ciclo di Krebs (TCA) e per la deacilazione proteica mitocondriale dipendente dalle sirtuine, MCART1 contribuisce all’omeostasi bioenergetica e alle risposte allo stress. L’alterazione della gestione del NAD mitocondriale può rimodellare la segnalazione metabolica e l’equilibrio delle specie reattive dell’ossigeno, processi frequentemente perturbati in contesti di malattie proliferative e degenerative. Di conseguenza, SLC25A51/MCART1 è di interesse per studi sulla funzione mitocondriale, sulla riprogrammazione metabolica e sulle relazioni genotipo-fenotipo in modelli cellulari umani.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MCART1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SLC25A51 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SLC25A51 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SLC25A51 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MCART1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SLC25A51 per lo studio della segnalazione di MCART1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SLC25A51 critici per la funzione di MCART1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SLC25A51 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal MCART1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal MCART1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SLC25A51. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal MCART1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR MCART1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SLC25A51 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SLC25A51 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.