Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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MBD4 Plasmide Double Nickase (h): sc-403156-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- MBD4 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il MBD4 Double Nickase Plasmid (h) e il MBD4 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira MBD4. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: MBD4 Antibody (D-6): sc-271530
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
MBD4 Plasmide Double Nickase (h) | sc-403156-NIC | 20 µg | $410.00 |
MBD4 (proteina 4 con dominio di legame a methyl-CpG) è una DNA glicosilasi che riconosce gli appaiamenti errati G:T e G:U derivanti dalla deaminazione delle citosine metilate e avvia la riparazione per escissione di basi (BER) per preservare l’integrità dei siti CpG. Attraverso il suo dominio di legame al methyl-CpG e l’interazione con il macchinario di riparazione dei mismatch, MBD4 collega il contesto epigenetico alla sorveglianza del genoma e contribuisce a limitare l’accumulo di mutazioni nei loci metilati. L’alterazione della funzione di MBD4 è associata a un aumento delle firme di transizione C>T e a fenotipi di instabilità dei microsatelliti, collegando questa via ai meccanismi di instabilità genomica osservati in molteplici tipi di tumore. Di conseguenza, MBD4 è ampiamente studiata nella ricerca sulla riparazione del DNA, sui processi mutazionali e sul mantenimento dell’epigenoma.
MBD4 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MBD4 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MBD4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MBD4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MBD4 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.