matrin-3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-418085-ACT

MATR3 codifica la matrin-3, una proteina legante RNA/DNA della matrice nucleare che contribuisce all’architettura del nucleo e coordina l’espressione genica attraverso interazioni con la cromatina e con complessi ribonucleoproteici. Matrin-3 partecipa allo splicing dell’RNA, alla stabilizzazione dell’mRNA e alla ritenzione nucleare, collegandosi così alla regolazione della maturazione dei trascritti e a programmi genici responsivi allo stress. La sua rete funzionale interseca vie che governano il metabolismo dell’RNA e l’organizzazione nucleo-citoplasmatica, processi spesso alterati nella neurodegenerazione. Un’attività di MATR3 disregolata e varianti patogene sono state associate a malattie del motoneurone e a fenotipi neuromuscolari correlati, a supporto del suo impiego come nodo meccanicistico per lo studio della biologia delle proteine leganti l’RNA.

matrin-3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MATR3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

matrin-3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MATR3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MATR3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di matrin-3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MATR3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da matrin-3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via matrin-3 nelle cellule tumorali con espressione di MATR3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.