Matrilin-2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404852-ACT

MATN2 codifica la matrilina-2, una proteina adattatrice modulare della matrice extracellulare (ECM) che contribuisce a organizzare le reti della matrice collegando collagene, proteoglicani e altre glicoproteine nei tessuti connettivi. La matrilina-2 supporta l’adesione cellula–matrice, l’architettura tissutale e i processi di rimodellamento dell’ECM che influenzano la migrazione cellulare, la meccanotrasduzione e la differenziazione. Un’alterata espressione di MATN2 è stata riportata in contesti di deposizione anomala della matrice e di rimodellamento cronico, inclusi microambienti fibrotici e infiammatori, e può influenzare la segnalazione stroma–epitelio. In quanto fattore associato alla matrice, la matrilina-2 è rilevante per lo studio dell’assemblaggio dell’ECM, dei programmi di tipo riparativo simili alla guarigione delle ferite e della regolazione microambientale del fenotipo cellulare.

Matrilin-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MATN2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Matrilin-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MATN2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MATN2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Matrilin-2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MATN2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Matrilin-2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Matrilin-2 nelle cellule tumorali con espressione di MATN2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.