MATH-5 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-415110-LAC

ATOH7 codifica il fattore di trascrizione bHLH (basic helix-loop-helix) MATH-5, un regolatore chiave della competenza neurogenica e della specificazione della linea delle cellule ganglionari retiniche durante lo sviluppo dell’occhio umano. MATH-5 integra programmi trascrizionali proneurali con Notch e altri segnali dello sviluppo per coordinare l’uscita dal ciclo cellulare e la differenziazione neuronale. Un’attività deregolata di ATOH7 è stata associata ad alterazioni nella formazione del nervo ottico e a una maggiore suscettibilità alle neuropatie ottiche, rendendolo rilevante per gli studi sullo sviluppo della retina e sui disturbi del sistema visivo. Poiché agisce a monte di molteplici determinanti del destino neuronale, ATOH7 è ampiamente utilizzato per indagare le reti di regolazione genica che controllano la neurogenesi e l’identità delle cellule retiniche.

Le particelle di attivazione lentivirale MATH-5 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di ATOH7 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale MATH-5 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione ATOH7, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di MATH-5. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo ATOH7 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.