Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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MATH-3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419232
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- MATH-3 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico MATH-3, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: MATH-3 Antibody (D-10): sc-393724
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
MATH-3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-419232 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Neurod4 codifica il fattore di trascrizione basic helix-loop-helix MATH-3, un regolatore neurogenico che promuove l’impegno verso la linea neuronale e la differenziazione durante lo sviluppo del topo. MATH-3 agisce all’interno di programmi trascrizionali che integrano reti bHLH proneurali e decisioni dipendenti da Notch per coordinare l’uscita dal ciclo cellulare, la specificazione dei sottotipi neuronali e la maturazione. Controllando l’espressione genica a valle nei tessuti neurali in sviluppo, Neurod4 influenza la neurogenesi, la crescita dei neuriti e l’avvio dei programmi sinaptici. Un’attività deregolata dei fattori bHLH neurogenici è ampiamente rilevante per i meccanismi del neurosviluppo e per i modelli che esaminano stati alterati di differenziazione neuronale.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MATH-3 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Neurod4 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Neurod4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Neurod4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MATH-3.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Neurod4 per lo studio della segnalazione di MATH-3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Neurod4 critici per la funzione di MATH-3
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Neurod4 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal MATH-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal MATH-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Neurod4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal MATH-3 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR MATH-3 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Neurod4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Neurod4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.