Mast Cell Chymase CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403686-ACT

CMA1は、マスト細胞の顆粒に貯蔵され、脱顆粒時に放出される、分泌型のキモトリプシン様セリンプロテアーゼであるマスト細胞キマーゼをコードします。キマーゼは細胞外マトリックスのリモデリングや生理活性ペプチドのプロセシングに関与し、組織微小環境における局所の炎症シグナル伝達や血管緊張の調節に影響を及ぼします。その活性は、プロテアーゼ活性化受容体、サイトカイン／ケモカイン・ネットワーク、ならびに線維化に関連するリモデリング・プログラムなど、マスト細胞駆動性の経路と相互に連関しています。CMA1の発現異常やキマーゼ活性の破綻は、アレルギー性炎症、喘息、心血管リモデリング、皮膚および肺の線維性疾患と関連づけられており、マスト細胞生物学の機序研究における有用な分子指標となります。

Mast Cell Chymase CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CMA1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Mast Cell Chymase CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CMA1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCMA1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Mast Cell Chymaseの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCMA1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMast Cell Chymase依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCMA1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMast Cell Chymase経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。